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小鼠小膠質(zhì)BV2“一代”指從細(xì)胞接種到分離再培養(yǎng)的一段期間,與細(xì)胞世代或倍增不同。在一代中,細(xì)胞培增3~6次。細(xì)胞傳代后,一般經(jīng)過(guò)三個(gè)階段:游離期、指數(shù)增生期和停止期。常用細(xì)胞分裂指數(shù)表示細(xì)胞增殖的旺盛程度,即細(xì)胞群的分裂相數(shù)/100個(gè)細(xì)胞。一般細(xì)胞分裂指數(shù)介于0.2%~0.5%,腫瘤細(xì)胞可達(dá)3~5%。接種2~3天分裂增殖旺盛,是活力好時(shí)期,稱指數(shù)增生期(對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期),適宜進(jìn)行各種試驗(yàn)。
收到小鼠小膠質(zhì)BV2后要如何處理?
1、首先,觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好。培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有,請(qǐng)拍照,并及時(shí)與致備技術(shù)支持聯(lián)系。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面,顯微鏡下觀察紐胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題,部分貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落;先不要打開培養(yǎng)蓋,將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱靜置培2-4小時(shí),以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)讀細(xì)胞說(shuō)明書,了解細(xì)胞相關(guān)信息,如貼壁特性(貼壁/懸浮)、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、如收到的細(xì)胞沒有相關(guān)培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn),建議消化時(shí)在顯微鏡下實(shí)時(shí)觀察消化情況,掌握細(xì)胞的最佳消化時(shí)間,若3分鐘內(nèi)無(wú)法脫落的細(xì)胞,可以在37℃條件下提高胰酶活性,適當(dāng)延長(zhǎng)時(shí)間,從加入胰酶到終止消化的過(guò)程,所有操作都要迅速。
5、建議收到細(xì)胞后的一次傳代比例為1/2最多不要超過(guò)1/3。
6、若小鼠小膠質(zhì)BV2拉絲、黏連則說(shuō)明消化過(guò)度,建議適當(dāng)縮短消化時(shí)間,若發(fā)現(xiàn)僅有一半細(xì)胞先脫落,則可以優(yōu)先終止,剩下的繼續(xù)消化。